3T3-L1 Mäuse Embryogene Fibrozellen Marke

Produktinformationen:

Gefrierflüssigkeit: 55% Basismedium + 40% FBS + 5% DMSO

Temperatur: Flüssiger Stickstoff

Kultivierungsprogramm A (Standard)：Wachstumsmedium: DMEM + 10% NCS + 1% P/S

Anbaubedingungen:Gasphase: Luft, 95%; CO2， 5%, Temperatur: 37°C

Empfohlenes Übertragungsverhältnis1:3-1:4

Hintergrundbeschreibung3T3-L1-Zellen sind kontinuierliche Unterstamme von 3T3 (schweizerische Mäuse), die durch Klonierung isoliert wurden. Wenn sich die 3T3-L1-Zellen von einer schnellen Teilung zu einer Vollität und einer Kontaktunterdrückung entwickeln, kehren sich die 3T3-L1-Zellen durch das Präfett zum Fett um. In der Kulturflüssigkeit kann ein hoher Serumgehalt die Anhäufung von Fett in 3T3-L1-Zellen fördern.

Alter (Geschlecht)Embryonen

ZelltypenSpontane ewige Zellen

BiosicherheitsklasseBSL-1

Rezeptor-ExpressionInsulin, ausgedrückt

ErhaltungsinstitutATCC; CL-173 ATCC; CCL-92.1BCRC; 6015

Transport und Lagerung:

Trockeneis Transport und Erholung von gut überlebenden Zellen

(1) 1mL Gefrierrohr Verpackung Trockeneis Transport, nach Erhalt von -80 Grad Kühlschrank aufbewahren über Nacht in flüssigen Stickstoff oder direkt Erholung, wenn Trockeneis gefunden wurde flüchtig und sauber, Gefrierrohr Flaschendeckel abgefallen, gebrochen und Zellen kontaminiert, bitte kontaktieren Sie uns sofort.

(2) T25-Flasche Erholung von überlebenden Zellen bei normaler Temperatur versendet, nach Empfang nach der Behandlung nach Empfang der Zelle.

Behandlung nach Empfang der Zellen:

1) Nach dem Empfang der Zellen, 75% Alkohol desinfizierte Flasche Wand T25 Flasche in 37 ° C Kulturkammer für ca. 2-3 h platziert, wenn die Kulturflasche gebrochen, Flüssigkeit überlaufen und die Zellen kontaminiert sind, bitte kontaktieren Sie uns rechtzeitig, nachdem Sie ein Foto gemacht haben.

2) Bitte bestätigen Sie den Zellstand unter dem 4- oder 5X-Mikroskop und machen Sie gleichzeitig 2-3 Fotos der gerade empfangenen Zellen (10 x, 20 x) und ein Bild des Aussehens der Kulturflasche, um den Zellstand nach dem Verkauf zu erhalten.

3) Klebstoffzellen: Die Zellen werden 2-3 h in einem 37 ° C-Kulturraum platziert, beobachten Sie das Wachstum der Zellen und den Klebstoffzustand unter dem Mikroskop, einige Klebstoffzellen fallen während des Express-Transports aufgrund der Vibration ab und nach dem Abfall der Gruppierung. Wenn die Wachstumsdichte der Zellen unter dem Spiegel betrachtet wird, wenn sie unter 60% liegt, können Sie das Intrusionsmedium aus der Flasche entfernen (wenn keine Zellen, die an der Wand geklebt sind, zentrifugiert werden müssen, in die ursprüngliche Flasche wieder suspendiert werden), das neu zusammengesetzte Medium 6-8 ml hinzufügen und in die Zellkultur weiterkultivieren. Wenn die Zellwachstumsdichte über 70-80% beträgt, kann die Zelle übertragen werden. Während der Übertragung müssen Zellen, die aufgrund von Transportvibrationen abgefallen sind, zentrifugiert zurückgewinnt werden.

Zellbehandlung:

1) Erholung der gefrorenen Zellen:

Das Gefrierrohr mit 1 ml Zellsuspension wird in einem 37 ° C Wasserbad schnell geschüttelt und in ein Zentrifugerrohr mit 4-6 ml Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren Sie 3-5min unter 1000 RPM, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Zellen im Medium. Die Zellsuspension wird dann über Nacht in eine Kulturflasche (oder Schalen) mit 6-8 ml Medium bei 37 ° C kultiviert. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Für die klebende Zelltransmission kann man sich auf die folgenden Methoden beziehen:

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. 0,25% (w / v) -0,53 mM EDTA in die Flasche (T25 Flasche 1-2 mL, T75 Flasche 2-3 mL) hinzufügen, in einem 37 ° C-Gehäuse für 1-2 Minuten verdauen (schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit angemessen verlängern), dann beobachten Sie die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen sich größtenteils runden und ausfallen, nehmen Sie schnell den Arbeitstisch zurück, klicken Sie auf die Flasche und fügen Sie 3-4 ml des Mediums hinzu, das 10% FBS enthält, um die Verdauung zu beenden.

3. Nach sanftem Schlagen und Absaugen, 3-5 Minuten unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen. Die Zellsuspension wird im Verhältnis von 1: 2 in eine neue T25-Flasche aufgeteilt, 6-8 ml eines neuen Mediums hinzugefügt, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um das Wachstum der Zellen zu erhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 je nach den tatsächlichen Umständen.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

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