SCC7 (Maus-Skamalzellen-Krebszellen)

Grundeigenschaften der Zelle

Gewebequelle: Schummenzellkrebs

Wachstumsmerkmale: Wandwachstum

Zellmorma: Epithelialzell

Hintergrundbeschreibung: SCC7-Maus-Flächenzellkrebszellen beziehen sich auf Zellen, die einzelne Zellen aus Gewebe oder Organen des Körpers, Kollagen und anderen Methoden erhalten und in vitro in der körperlichen Umgebung kultiviert werden.

Biosicherheitsklasse: 1

Zell-Spezifikationen: 1 x 106cells/T25 Kulturflasche oder 1ml Gefrierrohr Verpackung

Medium: 1640 + 10% FBS

Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

Gefrierbedingungen: Gefrierflüssigkeit: 90% FBS, 10% DMSO,

Zeitverdoppelung: 2 bis 3 mal pro Woche

Übertragungsverhältnis: 1:2

Frequenz des Wechsels: 2-3 Tage Wechsel

II. Zellkultur

1) Erholung von Zellen: Die folgenden Zellkultur Gefrierbehandlung ist nur zur Information, die spezifischen Betriebsschritte in der Lieferanwendung zum Produkt

Ein Gefrierrohr mit 1 ml Zellsuspension wird schnell in einem 37 ° C Wasserbad geschüttelt und mit 4 ml Medium gleichmäßig vermischt. Zentrifugieren Sie 3 min bei 1000 U/min, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach 1-2 ml Medium. Die gesamte Zellsuspension wird dann über Nacht in eine Flasche mit einer moderaten Menge an Medium kultiviert (oder die Zellsuspension in eine 6-cm-Scheibe mit ca. 4 ml Medium kultiviert und über Nacht kultiviert). Am dritten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

a、 Wenn die Zellen wachsen, um 80% der Fläche der Kulturflasche zu bedecken, werfen Sie die Kulturflüssigkeit in der 25cm2-Flasche und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS;

b、 Fügen Sie 0,25% Verdauungsflüssigkeit etwa 1 ml in die Kulturflasche hinzu, beobachten Sie es unter dem umgekehrten Mikroskop, bis die Zellen sich zurückziehen, um die Verdauung zu beenden, fügen Sie die Kulturflüssigkeit hinzu, dann blasen Sie die Zellen leicht ab, und übertragen Sie die Suspension in ein 15ml-Zentrifugerrohr, 1000rpm Zentrifuge für 5min;

c、 Verwenden Sie das Serum, sedimentierte Zellen mit 12 ml Medium wieder suspendiert, dann im Verhältnis von 1: 2 für die Flaschenübertragung, und schließlich in 37 ° C, 5% CO2 Zellkultur;

d、 Nach dem Aufkleben der Zellwand beobachten Sie die Kulturergebnisse und führen Sie anschließend eine Wechselkultur oder Vermehrung durch.

3) Zellfrieren: Wenn der Zellwachstumszustand gut ist, können Zellen gefriert werden. Ein Beispiel für die Flasche T25:

a、 Wenn die Zellen wachsen, um 80% der Fläche der Kulturflasche zu bedecken, werfen Sie die Kulturflüssigkeit in der 25cm2-Flasche und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS;

b、 Hinzufügen von 0,25% Verdauungsflüssigkeit etwa 1 ml in die Kulturflasche, beobachten Sie unter dem umgekehrten Mikroskop, bis die Zellen zurückziehen, um die Verdauung zu beenden, fügen Sie die Kulturflüssigkeit hinzu, blasen Sie die Zellen leicht, um sie zu entfernen, und dann übertragen Sie die Suspension in eine 15ml Zentrifugeröhre, 1000rpm Zentrifuge für 5min;

c、 Suspendieren Sie die Zellen mit einer angemessenen Menge an Gefrierflüssigkeit (FBS: DMSO = 9: 1) und legen Sie sie in ein Gefrierrohr;

d、 Stellen Sie zunächst die Zellfrierröhre bei -20 ° C für 1,5 h, bewegen Sie sie dann über Nacht in -80 ° C und übertragen sie nach 24 h in flüssigen Stickstoff zur Langzeitaufbewahrung. Die Kältebox kann direkt in -80 ° C eingesetzt werden.

III. Aufmerksamkeit fördern

1. Nach dem Empfang der Zellen zuerst beobachten, ob die Zellflasche intakt ist, ob die Kulturflüssigkeit Leckage, Trübe und andere Phänomene hat, wenn das oben genannte Phänomen auftritt, kontaktieren Sie uns bitte rechtzeitig.

2. Lesen Sie die Zellanleitung sorgfältig und verstehen Sie die zellbezogenen Informationen, wie die Zellmormologie, das verwendete Kulturmedium, das Serum-Verhältnis, die erforderlichen Zytokinen usw., um sicherzustellen, dass die Zellkulturbedingungen konsistent sind, wenn aufgrund der Inkonsistenz der Kultivbedingungen die Zellen zu Problemen führen, trägt der Kunde die Verantwortung selbst.

Die Oberfläche der Zellflasche mit 75% Alkohol wischen und den Zustand der Zelle unter dem Mikroskop beobachten. Aufgrund von Transportproblemen sind einige Zellen aufgrund von Temperaturänderungen und heftigen Berührungen zu zerstören, was ein normales Phänomen ist. Nach der Beobachtung des guten Zellstands wird die Flaschenwand mit 75% Alkohol desinfiziert und die T25-Flasche für 2-4 Stunden in eine 37 ° C-Kultivkammer gelegt.

4. Klebstoffzellen können verdaut werden, die suspendierten Zellen direkt gemischt, um die Zellen zu sammeln, 900 rpm-1000 rpm 3 min zentrifugieren und auflösen. Fügen Sie 5 mL PBS Zellen resuspendieren, dann 900 rpm-1000 rpm Zentrifugieren für 3 min, resuspendieren Sie die Zellen mit frischem Medium und impftieren Sie in eine neue Flasche oder Petrischale und legen Sie sie in einem Kühlraum für die Kultivierung.

5. Bitten Sie den Kunden, ein Medium unter den gleichen Bedingungen für die Zellkultur zu verwenden.

Es wird empfohlen, dass der Kunde in den ersten 3 Tagen nach Erhalt der Zelle ein paar Zellfotos aufnimmt, um den Zellstand aufzuzeichnen und die Kommunikation mit unserer technischen Abteilung zu erleichtern. Wenn einzelne empfindliche Zellen aufgrund des Transports instabil sind, wenden Sie sich bitte rechtzeitig an uns, um die spezifischen Situationen der Zellen zu informieren, damit unsere Techniker den Rückzug verfolgen können, bis das Problem gelöst ist.

Die Zelle dient ausschließlich der wissenschaftlichen Verwendung.

8. Hinweis: das Transportmedium (Irrigationsmedium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie es durch ein neues Medium, das gemäß den Bedingungen der Anleitung zur Zellkultur entwickelt wurde, um Zellen zu kultivieren. Die erste Übertragung nach Empfang der Zellen empfiehlt eine 1:2-Übertragung.

Hinweis: Die 1:2-Übertragung bedeutet, dass eine T25-Flasche 2 T25-Flaschen oder 2 6 cm-Schalen übertragen wird. Nicht 1 T25 Flasche 2 10cm Teller.

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