Spezielles Medium für Ratten Primäre Thymogenesische Fibrozellen

Beschreibung:

Dieses Produkt wurde sorgfältig vom Team optimiert und nach langfristigen Tests ein gutes Wachstum der primären thymogenic fibroblasts bei Ratten aufrechterhalten.

Dieses Produkt enthält bereits eine Vielzahl von Zutaten, die für das Wachstum von primären Thymozyten von Ratten erforderlich sind, ohne Zutaten hinzuzufügen, die direkt mit primären Thymozyten von Ratten kultiviert werden können.

Hauptbestandteile des Produktes

Transport und Lagerung

Transport:Tieftemperaturtransport in einem Isolator mit Bio-Eisbeutel

保存方法Nach den entsprechenden Lagerbedingungen 12 Monate aufbewahren, das konfigurierte Medium 2 ° C bis 8 ° C, 2 Monate aufbewahren;

Qualitätskontrolle

Hinweis:

Nur für wissenschaftliche Zwecke.

Einige Komponenten des Kultursystems sind für die menschliche Gesundheit schädliche Substanzen, bitte berühren Sie nicht die Flüssigkeit des Kultursystems und das Innere des Behälters mit Flüssigkeitsresten des Kultursystems mit der exponierten Haut; Dieser Teil der gefährlichen Substanzen ist sowohl konzentriert als auch gefährlich und kann bei Kontakt sofort mit Leitungswasser gespült werden.

Schritte der Zellkultur:

Vorbereitung von Kulturmitteln und Kultureinfrierungsbedingungen:

1) DMEM-H-Medium vorbereiten (NaHCO3 1,5 g/L hinzufügen), 90%; Rinderserum, 10%. Es ist auch möglich, das Suspensionsmittel entsprechend den experimentellen Bedürfnissen zu wählen, um 293T-Zellen zu suspendieren.

2) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

3) Gefrierflüssigkeit: 90% Medium, 10% DMSO, jetzt verfügbar. Flüssiger Stickstoff speichern.

2. Zellbehandlung:

1) Erholungszellen: Die Gefrierrohre mit 1 ml Zellsuspension werden schnell in einem 37 ° C-Wasserbad geschüttelt und aufgefroren und 4 ml Medium hinzugefügt, um gleichmäßig zu mischen. Zentrifugieren Sie bei 1000 RPM für 4 Minuten, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und blasen Sie nach 1-2 ml Medium. Dann fügen Sie alle Zellsuspension in eine Kulturflasche, um über Nacht zu kultivieren (oder fügen Sie die Zellsuspension in eine 10-cm-Scheibe mit etwa 8 ml Medium, um über Nacht zu kultivieren). Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 80% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden.

Für klebende Zellen kann sich die Übertragung auf folgende Methoden beziehen:

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. Fügen Sie 2 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in die Kultivflasche, in 37 ° C in der Kultivkammer für 1-2 Minuten zu verdauen, dann beobachten Sie die Zellverau unter dem Mikroskop, wenn die Zellen zum größten Teil runden und fallen, schnell wieder auf den Arbeitstisch, ein paar Klicks auf die Kultivflasche und fügen Sie eine kleine Menge Medium zur Verdauung zu beenden.

3. Drücken Sie 6-8 ml / Flasche, um das Medium zu ergänzen, nachdem Sie es sanft schlagen und aussaugen, 4 Minuten unter 1000 RPM zentrifizieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit ergänzen und ausblasen.

Verteilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 in neue Schalen oder Flaschen mit 8 ml Medium.

3) Zellfrieren: Wenn der Zellwachstumszustand gut ist, kann die Zellfrierung durchgeführt werden. Wenn die Zellen gefroren werden, fügen Sie eine kleine Menge des Mediums hinzu, nachdem die Zellen abgerundet sind, fügen Sie etwa 1 ml serumhaltiges Medium in die Gefrierröhre hinzu und fügen Sie 10% DMSO hinzu, um zu gefrieren.

Wie können Zellen gefriert werden?

Gefriererhaltung Methode 1: Gefrierrohr bei 4 ° C für 30 ~ 60 Minuten → (-20 ° C für 30 Minuten *) → -80 ° C für 16 ~ 18 Stunden (oder über Nacht) → Flüssiger Stickstoff Tank Dampfphase Langzeitlagerung.

Gefriererhaltungsmethode 2: Das Gefrierrohr wird in der programmierbaren Kühlmaschine des festgelegten Verfahrens auf 1-3 ° C bis -80 ° C pro Minute gelegt und dann in die Dampfphase des Flüssigstickstofftanks gelagert. -20 ° C darf nicht mehr als 1 Stunde, um zu verhindern, dass Eiskristalle zu groß sind und eine große Anzahl von Zellen sterben, können Sie diesen Schritt auch überspringen, um direkt in den Kühlschrank -80 ° C zu setzen, aber die Überlebensrate ist etwas geringer.

Produkte, die das Unternehmen verkauft:

1) Vorwärme das Medium in einem Wasserbad von 37 ° C; Bereiten Sie ein 15 ml steriles Zentrifugerrohr vor und fügen Sie 8 ml Vorwärmmedium hinzu.

2) Entfernen Sie die gefrorenen Zellen aus dem flüssigen Stickstoffbehälter und setzen Sie sie schnell in den 37 ° C-Wasserbad (Sie können einen sauberen Becher vorbereiten und 37 ° C Wasser füllen, nachdem das Zellfrierrohr entfernt wurde, werden sie schnell in den Becher gelegt und dann allmählich in den Wasserbad übertragen). Schütteln Sie das Gefrierrohr sanft, so dass die Zellen in 1 bis 2 Minuten auftauen können, so dass die Zellen so schnell wie möglich durch den anfälligen Temperaturbereich (-5 ~ 0 ° C) passieren können. Achten Sie darauf, dass das Gefrierrohr nicht in das Wasser gelangen kann, um eine Verschmutzung zu vermeiden.

3) Wäschen Sie die Gefrierrohre mit 75% Alkohol und setzen Sie sie in den Supernet-Tisch, übertragen Sie die Zellen im Rohr in die vorbereitete Zentrifugaröhre, blasen Sie sanft die Flüssigkeit, damit die Zellen gleichmäßig verteilt werden, senken Sie die DMSO-Konzentration und vermeiden Sie die Blasen beim Blasen. Die Rohrwande mit frischem Medium zweimal waschen und in das Zentrifugerrohr übertragen.

4) 800rpm Zentrifuge 5min, werfen Sie die Reinigung, fügen Sie frisches Medium, blasen Sie zu einer Zellsuspension.

5) Übertragen Sie die Zellsuspension in die T25-Zellflasche, fügen Sie die angemessene Menge an Medium hinzu, schütteln Sie die Zellflasche sanft, um die Zellen gleichmäßig zu verteilen, und legen Sie sie in den Wärmeraum für die Kultur.

6) Am nächsten Tag beobachten Sie das Wachstum der Zellen und tauschen Sie frisches Medium aus, um tote Zellen zu entfernen. Fortsetzen Sie die Kultivierung, bis die Zellen zu 80 bis 90% convergieren, um normal zu übertragen. In der Regel müssen gerade erholte Zellen 2-3 Mal übertragen werden, bevor die nachfolgenden Experimente durchgeführt werden können, nachdem sich die Zellkraft wiederhergestellt hat.