TRzol (Total RNA Extraktion)

TRzol (Total RNA Extraktion)

Produktvorstellung:

TRzol-Reagenzien sind Reagenzien, die die gesamte RNA direkt aus Zellen oder Geweben extrahieren. Es behält die Integrität der RNA beim Zerbrechen und Auflösen von Zellen. Nach Zugabe von Chlorform wird die Probe in eine Wasserschicht und eine organische Schicht aufgeteilt. RNA befindet sich im Wasser. Nach der Sammlung der oben genannten Wasserprobenschicht kann die RNA durch Isopropanolabsetzung wiedergewonnen werden.

Ob menschliches, tierisches, pflanzliches oder bakterielles Gewebe, diese Methode hat eine bessere Isolierungswirkung für kleine und große Mengen an Gewebe und Zellen. Die einfache Bedienung des TRzol-Reagents ermöglicht die gleichzeitige Bearbeitung mehrerer Proben. Alle Operationen können innerhalb einer Stunde durchgeführt werden. Die von TRzol extrahierte GesamtRNA verhindert die Kontamination von DNA und Proteinen. Daher ist es möglich, RNA-Abdruckanalyse, Spot-Hybridisierung, Poly(A)+ Selektion, in vitro Transkription, RNA-Enzym-Schutzanalyse und molekulare Klonierung durchzuführen.

TRzol-Reagentien fördern die Abspaltung verschiedener RNA mit unterschiedlichen Molekulargewichten. Beispielsweise wurde RNA aus der Leber von Ratten extrahiert, die durch Ionasegel-Elektrophoresis und mit B-Bromid-Ingots gefärbt wurde, und viele nicht kontinuierliche Streifen mit hohem Molekulargewicht zwischen 7 kb und 15 kb (mRNA und hnRNA-Komponenten), zwei vorteilhafte Ribososomen von ~ 5 kb (28S) und ~ 2 kb (18S) und niedrige Molekulargewicht-RNA zwischen 0,1 und 0,3 kb (tRNA, 5S) zu erkennen. Wenn die extrahierte RNA mit TE verdünnt wurde, war ihr A 260 / A 280-Verhältnis ≥ 1,8.

Lagerung: TRzol kann 12 Monate lang bei Raumtemperatur stabil gelagert werden. Für optimale Ergebnisse empfehlen wir jedoch, sie bei 2-8 ° C zu bewahren. (Detaillierte Bedienung siehe Anleitung)

Vorlage-DNA: Die PCR-Reaktion erfordert Vorlage-DNA, wie die Extraktion von DNA aus Zellen, Gewebe, Blut usw.

2. Protor: Zwei Protore der PCR-Reaktion, jeweils mit den beiden Enden der Vorlage-DNA gepaart, um die spezifische Region zu vergrößern, die erforderlich ist, können die Protore auch in TA-Klonen und anderen Prozessen verwendet werden.

3. dNTPs: In der PCR-Reaktion werden vier Arten von dNTPs benötigt, darunter Deoxyadenotid (dATP), Deoxythymotid (dCTP), Deoxybirdotid (dGTP), Deoxycytosinsäure (dTTP), für biologische Prozesse wie Zellteilung, DNA-Synthese und andere, für die Verlängerung und Amplifikation der SchablonenDNA-Kette für PCR-Amplifikation;

4. Taq-DNA-Polymerase: Polymerase, die für die PCR-Reaktion erforderlich ist, wird in der Regel Taq-Polymerase verwendet, und es gibt einige andere Arten von Polymerasen wie PFU, Phusion usw., um die DNA-Kette zu vergrößern;

5. PCR-Pufferlösung: Pufferwirkung auf die PCR-Reaktion, Regulierung des Reaktions-pH-Werts, Hydrosulfat-Sulfatsalz SDS, kleine molekulare organische Verbindungen wie Formaldehyd, können die PCR-Reaktionsspezifizität verbessern und somit die Reaktionseffizienz verbessern;

Enzymschnitt: PCR-Amplifikation beinhaltet häufig experimentelle Schritte wie Rekombination, Konstruktion und Sequenzierung, die häufig eine Enzymschnitt erfordern.

MARK: Ein Molekulargewichtskriterium, das verwendet wird, um die Größe von DNA-Fragmenten zu bestimmen.

8. DNA-Reinigungskit: zur Reinigung von PCR-Reaktionsprodukten;

Nak Brei; Oligo DT
Bei der Auswahl von Oligo dT muss die RNA Poly A haben, so dass die mRNA von Eukaryoten geeignet ist. RT, geeignet für langkettige oder sogar volle mRNA, hat hohe Qualitätsanforderungen an die RNA-Probe, ohne offensichtliche DNA-Kontamination, RNA-Abbau und RNA-Bruch. Wenn Sie eine neue mRNA für eine RT-Reaktion erforschen möchten, wird die Verwendung eines Oligo dT-Primiers empfohlen. Die Verwendung von Oligo dT-Primären bietet bessere Stabilität als zufällige und spezifische Primäre.
② Zufällige Vorläufer
RT ist für eine Vielzahl von RNA geeignet, insbesondere für Fälle, in denen die Fülle der Schablonen sehr gering ist (z. B. eine geringe Genexpression). Bei der Auswahl eines zufälligen Primiers wird die gesamte RNA in der Kettensynthese verwendet und der Primier für eine spezifische Amplifikation bei der PCR-Reaktion entworfen. Beachten Sie auch die Beziehung zwischen der Menge von Zufallsprozidenten und der GesamtRNA-Menge, empfiehlt sich im Allgemeinen, dass die Zufallsprozidenten pro 5 µg GesamtRNA 50 ng verwenden, wenn die Zufallsprozidenten pro 5 µg GesamtRNA mehr als 250 ng verwenden, kann dies zu einer Zunahme der kleinen Fragmente (< 500 bp) und einer Verringerung der langen Fragmente und der gesamten Länge führen.
Spezifische Vorzüge
Ein genspezifischer Vorläufer (GSP) ist ein Teil einer bestimmten Gensequenz und ein Vorläufer, der die Vorlage komplementär ist. Der Prototyp muss in Verbindung mit der bekannten Sequenz der ZielRNA entworfen werden. Aufgrund der spezifischen Bindung von Prototypen und RNA-Sequenzen benötigt jede ZielRNA einen neuen Satz genetisch spezifischer Prototypen. Daher müssen bei der Analyse mehrerer Ziele mehr RNA-Proben angewendet werden. Darüber hinaus sind die Temperaturen der Erbrennung verschiedener Vorläufer anders, daher wird die Verwendung im Allgemeinen nicht empfohlen. Bei Bedarf an spezifischen Vorläufern wird empfohlen, die Ausbrenntemperatur zu optimieren.