293 HEK-293 (menschliche embryonale Nierenzellen)

293 HEK-293 (menschliche embryonale Nierenzellen)

Nicht nennen.Hek293; HEK-293; HEK 293; HEK:293; 293; 293 HEK; Menschliche embryonale Niere 293

Kultivierungsprogramm A (Standard)

Wachstumsmedium:

MEM (ATCC Verbesserung) + 10% FBS + 1% P/S

Anbaubedingungen:

Gasphase: Luft, 95%; CO2， 5%, Temperatur: 37°C

HinweiseDie Zellwand ist lose, bitte bei der Bedienung so sanft wie möglich; Vorwärmmedium beim Wechsel; Empfang Wenn es große Stücke von Zellen, die fallen, ist ein normales Phänomen, bitte folgen Sie den Empfangsvorkehrungen.

Referenzen (Quellen)

Hintergrundbeschreibung ist die Bildung von epibiotischen Zellen durch geschnittene humane adenovirus 5 (Ad5) transfizierte menschliche embryonale Nierenzellen, die das transfizierte Ad5-Gen enthalten und ausdrücken. Frühere Berichte zeigten, dass das Genom die linke und rechte Ende des Adenovirus-5-Genoms enthielt, aber jetzt ist klar, dass nur die linke Ende der DNA vorhanden ist. Nach der Klonsequenz des Insertionspunkts von Ad5 wurde festgestellt, dass das 1-4344-Bit-lineare Nukleotid von Ad5 in Chromosom 19 (19q13.2) integriert wurde. Als Gastgeber der Amplifikation des humanen adenoviralen Trägers kann der Zelloberflächenrezeptor, der abnorme Boleonin ausdrücken, bestehen aus der Subeinheit Integrin β1 und der Subeinheit Boleonin-Rezeptor α-v.

Alter (Geschlecht)Fötus

OrganisationsquellenNieren; Transformation durch Adenovirus 5DNA

ZelltypenTransformation der Zelllinie

BiosicherheitsklasseBSL-2

Zeit verdoppeln~ 24-30 Stunden

TumorogenJa, bildet Tumoren bei nackten Mäusen.

Rezeptor-ExpressionVitronektin

ErhaltungsinstitutATCC; CRL-1573 ATCC: PTA-4488 DSMZ: ACC-305 ECACC: 85120602

Zellbehandlung:

1) Erholung der Gefrierzellen: Die Gefrierröhre, die 1 ml Zellsuspension enthält, wird schnell in einem 37 ° C-Wasserbad geschüttelt und aufgefroren und gleichmäßig in ein Zentrifugerrohr mit 4-6 ml Medium vermischt. Zentrifugieren Sie 3-5min unter 1000 RPM, entfernen Sie die Oberflüssigkeit und suspendieren Sie die Zellen im Medium. Die Zellsuspension wird dann über Nacht in eine Kulturflasche (oder Schalen) mit 6-8 ml Medium bei 37 ° C kultiviert. Am nächsten Tag wird das Zellwachstum und die Zelldichte unter dem Mikroskop beobachtet.

2) Zelltransplantation: Wenn die Zelldichte 70% -90% beträgt, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden. Die Zelle ist eine suspendierte und leicht klebende Zelle, die sich auf die folgenden Methoden beziehen kann:

1. Sammlung: Sammeln Sie die suspendierten Zellen in der Kulturflasche in die Zentrifuge. Waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium und Magnesium. Da die Zellen nach der PBS-Schmierung nicht fest kleben, fallen die Zellen ab, so dass PBS auch in die Zentrifuge zurückgewinnt wird.

2, 0,25% (w / v) 0,53 mM EDTA in der Kultivflasche (T25 Flasche 1-2 mL, T75 Flasche 2-3 mL) in 37 ° C in der Kultivkammer für 1-2 Minuten verdauen (schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit angemessen verlängern), dann beobachten Sie die Zellverauung unter dem Mikroskop, wenn die Zellen sich größtenteils runden und schnell wieder auf den Arbeitstisch fallen, klicken Sie auf die Kultivflasche und fügen Sie 3-4 ml des Mediums hinzu, das 10% FBS enthält, um die Verdauung zu beenden.

3, die gesammelten Zellen in der Suspension, die Zellen in der PBS-Reinigungsflüssigkeit und die verdauten Klebstoffzellen in 1000 rpm Zentrifuge für 5 Minuten, entfernen Sie die Oberflüssigkeit, fügen Sie 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzu und mischen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in die neue T25-Flasche aufteilen, fügen Sie 6-8 ml des neuen Mediums hinzu, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um die Wachstumsleistung der Zelle aufrechtzuerhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 ~ 1: 5 nach den tatsächlichen Umständen.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren. Hier ist ein Beispiel für die Flasche T25:

1, wenn die Zellen gefriert werden, sammeln Sie verdaute Zellen in die Zentrifuge nach dem Prozess der Zelltransmission, können Sie die Blutzählplatte verwenden, um die Gefrierdichte der Zellen zu bestimmen. Die empfohlene Gefrierdichte für allgemeine Zellen beträgt 1 x 106 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml.

2, 1000 rpm Zentrifuge 3-5min, entfernen Sie die Oberfläche. Zurücksuspendieren Sie die Zellen mit der vorbereiteten Zellfrierflüssigkeit, verteilen Sie die Zellen in ein Gefrierrohr nach 1 ml Gefrierflüssigkeit, die 1 x 106 ~ 1 x 107 lebende Zellen / ml enthält, und kennzeichnen Sie den Namen, die Algebra, das Datum und andere Informationen.

Legen Sie die Zellen, die eingefroren werden sollen, in die Kühlbox des Programms und übernachten Sie in einem -80-Grad-Kühlschrank, bevor sie in einen flüssigen Stickstoffbehälter gelagert werden. Aufzeichnen Sie auch die Position der Gefrierrohre im flüssigen Stickstoffbehälter für die spätere Überprüfung und Verwendung.

Betriebsschritte:

Schritt 1: Entfernen Sie das serofreie, unprogrammatische Gefriermittel aus dem Kühlschrank

Schritt 2: Zentrifugieren Sie die Zellen in der Logarithmus-Wachstumsperiode sammeln (Zellen verdauen und zentrifugieren, Zellen in der Suspension direkt zentrifugieren, Drehzahl 1200rpm oder 250g, Zeit 3min)

Schritt 3: Entfernen Sie das Oberserum und fügen Sie eine angemessene Menge serofreier nicht-prozeduraler Gefrierflüssigkeit hinzu und suspendieren Sie die Zellen wieder

Schritt 4: Verteilen Sie die Menge von 1 bis 1,5 ml / Rohr in das Gefrierrohr, schrauben Sie den Rohrdeckel fest und markieren Sie es gut

Schritt 5: Das Gefrierrohr direkt in den Kühlschrank bei -80 ° C verschieben und nach 24 Stunden in flüssigen Stickstoff übertragen

Eine manuelle Gradientkühlung kann ausgewählt werden, wenn keine Gefrierbox oder eine nicht-programmatische Gefrierflüssigkeit vorhanden ist. Die manuelle Gradientkühlung ist jedoch nicht für alle Zellen geeignet und der Effekt ist instabil und erfordert zunächst einen Gefriertest.

Hinweis:

1, nach dem Empfang der Zellen, wenn Trockeneis ist flüchtig und sauber, Gefrierrohr Flaschendeckel fallen, gebrochen und die Zellen sind verschmutzt, bitte kontaktieren Sie uns sofort.

2, die empfangenen Zellen nicht zuerst den Flaschendeckel öffnen, den Flaschenkörper abwischen Alkohol nach 2-4 Stunden (abhängig von der Zelldichte) in der Kulturkammer stehen lassen, um den Zellzustand zu stabilisieren. Anschließend beobachten Sie das Zellwachstum unter dem umgekehrten Mikroskop und fotografieren Sie die Zellen in verschiedenen Vielfachen (es wird empfohlen, ein Foto des Gesamtaussehens der Zellen zu machen, um die Farbe des Mediums und ob es Leckagen gibt, und anschließend den Zellstand unter dem Mikroskop aufzunehmen, je 100 *, 200 *), um zu beobachten, ob die Zellen während des Transports kontaminiert sind. als Grundlage für unseren Verkauf.

Da der Zellstand von Umwelt-, Betriebs- und Transportfaktoren beeinflusst wird, gewährleistet das Unternehmen nur, dass der Kunde den Zellstand innerhalb einer Woche nach dem Empfang der Zelle erhält, so dass der Kunde nach dem Verkauf den Nachweis des Empfangs der Zelle vorlegen muss und der Kunde die Lieferzeit zur Verfügung stellt und das Kundendienstpersonal nach der Erkenntnis des Problems kommuniziert, kann der Zeitraum nicht größer als 7 Tage sein.

Alle tierischen Zellen werden als potenziell biologisch gefährlich angesehen, müssen in einem zweiten Biosicherheitsstand betrieben werden, und achten Sie bitte auf den Schutz, alle Abfälle und Gefäße, die mit dieser Zelle in Berührung kamen, müssen sterilisiert werden, bevor sie weggeworfen werden können.
Produkte, die das Unternehmen verkauft:

Maus-Skelett-Muskelfibrozyten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Neurologische Vorläuferzellen von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Neurologische Vorläuferzellen von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Maus Knochenmark hemotrophische Stammzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Ratten Atemkörpernzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Mäusenfleisch Fibrozellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Periphere Blut-Lymphozyten von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Maus-Darm-Membran glatte Muskelzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Glatte Muskelzellen in den Nackenarterien von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Echte Fell-Brustwarzeln von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Embryonale Stammzellen zwischen Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Pukeno-Zellen von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Neurale Stammzellen des Rückenmarks bei Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Embryonale Stammzellen von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Dreifachen Neuronen von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Mikrovaskuläre Perizellen der Netzhaut von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Rattenzahnmagstammzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Maus Knochenmark einzelne Nukleozellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Ratten Penis Weißmembran Fibrozellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Dreifahlige Neuronen von Mäusen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Ratten riechen Kugelzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Maus Vaginalwand Fibrozellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Ratten Hüftenknorpelzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

293 HEK-293 (menschliche embryonale Nierenzellen) Maus-Phillipo-Darm-Muskelzellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Pukeno-Zellen von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche

Mäuse konsolidiert Fibrozellen5×105Cells/T25 Kulturflasche

Embryonale Stammzellen von Ratten5×105Cells/T25 Kulturflasche