Humaner Temperaturbedarfsfaktor A1 (HTRA1)

Faktoren der hohen TemperaturbedarfA1 (HTRA1) recombinantes Protein

Produktname: HochtemperaturnachfragefaktorA1 (HTRA1) recombinantes Protein

Englischer Name:Rekombinanter Hochtemperaturanforderungsfaktor A1 (HTRA1)

HtrA; L56; ORF480; PRSS11; HtrA Serinpeptidase 1; Protease, Serin, 11; IGFBP5-Protease; Hochtemperaturbedarf A Serinpeptidase 1

Modell:CS-D003

Enzyme und Kinase

Arten:Homo sapiens (Mensch)

Quelle: Original Expression

GastgeberE. coli

Endotoxinspiegel:< 1,0 EU/μg (LAL-Messung)

Subzellpositionierung: Sekretion, Zytoplast

Vorhersage des Molekulargewichts:47,2 kDa

Wirkliches Molekulargewicht:47kDa (Differentialanalyse siehe Anleitung)

Fragmente und Etiketten:Gly204~Leu364 mit N-Terminal His und GST Tag

Pufferbestandteil:20 mM Tris, 150 mM NaCl Puffer (pH 8,0, enthält 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0,01 % SKL, 5 % Trehalose und Proclin300)

Eigenschaften: Gefriertrocknetes Pulver

Reinheit:> 90%

Wartezeit:6.6

Anwendung:Positive Kontrolle; Immunogen; SDS-PAGE; WB.

Spezifikationen:10μg50μg200μg1mg5mg

1. Gewebeproteinextraktion

1) Notwendige Ausrüstung: Eismaschine, Markierungsstift, zwei Sätze 1,5 ml EP-Röhren (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), eine große Eisbox, eine 1,5 ml EP-Röhrenbox, Handschuhe, Augenschreier (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), frisches Gewebe oder Gewebe, das bei -80 ° C im Kühlschrank aufbewahrt wird, PBS (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung) bei 4 ° C im Kühlschrank aufbewahrt wird, Pipette, Saugkopf (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), zwei Sätze Schleifstäbe (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), Handzentrifuge, Filterpapier, Tri-Destruction-Lösung, Benzylsulfonsäurefluor (PMSF, ein Protease-Inhibitor, stark giftig), Zentrifuge, Becher, 2 x SDS-Gel-Puffer, Disulfukol (DTT), Schütter, Schaumplatte.

a. Eisherstellungsmechanismus;

b. Markierungsstift markiert zwei Sätze EP-Röhren;

c. Big Ice Box, EP Tube Box auf Eis verpackt, eine Reihe von Markierungsstufen gut markiert EP Tube in der großen Eisbox platziert, eine andere Reihe von Markierungsstufen gut markiert EP Tube in der EP Tube Box platziert, Handschuhe tragen, bringen Sie die EP Tube Box, Augen schneiden Sojabohnen Größe (ca. 100 mg) frisches Gewebe oder auf -80 ° C Kühlschrank Gewebe aufbewahren;

d. PBS, das im Kühlschrank bei 4 ° C gespeichert ist, in das EP-Röhrchen 1 ml PBS tropfen, Augen schneiden, Gewebe schneiden (schnelle Bewegung), Handtaschenzentrifugieren, Oberflüssigkeit abwerfen, dann 1 ml PBS in das EP-Röhrchen tropfen, Schleifstab schleifen, 3.000 Drehungen 10 Minuten zentrifugieren, Oberflüssigkeit abwerfen, Filterpapier saugt die Restflüssigkeit der Rohröhre so trocken wie möglich, schätzt das Volumen der Niederlage in dem EP-Röhrchen, die oben genannten Schritte arbeiten so weit wie möglich auf Eis;

e. Entfernen Sie die dreifache Entkrachungslösung aus dem 4 ° C-Kühlschrank, -20 ° C-Kühlschrank, PMSF in einem großen Eiskasten zu entfernen, Tropfen Sie das 3-5-fache Volumen der Abfälle in das EP-Rohr mit der dreifachen Entkrachungslösung (in der Regel das 5-fache), fügen Sie PMSF hinzu (das Verhältnis von 94: 6), schleifen Sie den Schleifstab (20-30 Minuten auf Eis vollständig geklatzt), alle oben genannten Schritte müssen durchgeführt werden;

f. Die Zentrifuge ist vorgekühlt und die Gewebeflüssigkeit nach vollständiger Klärung bei 4 ° C und 10.000 Drehungen für 10 Minuten zentrifugiert wird;

g. Waschen Sie das Becher mit Leitungswasser, gießen Sie es in ein einziges Dampfwasser und kochen Sie es im Ofen;

h. Bereiten Sie 2 x SDS-Gel-Probenpuffer vor (bei normaler Temperatur gelagert), entfernen Sie das DTT, das im Kühlschrank bei -20 ° C gespeichert ist, in eine große Eisbox setzen, die obere Flüssigkeit nach Zentrifugierung mit einer Pipette in einen anderen Satz von EP-Rohren quantifizieren (keine Niederlage absaugen), drücken Sie die obere Flüssigkeit: 2 x SDS: DTT = 1: 0,8: 0,2 2 x SDS und DTT hinzufügen, zentrifugieren Sie vorsichtig und legen Sie das EP-Rohr vorsichtig in die Schaumstoffplatte ein und kochen Sie 6-8 Minuten in einem gekochten Becher (die Ofenleistung sollte nicht zu groß sein, um zu vermeiden, dass der Rohrdeckel explodiert);

i. Entfernen Sie die Schaumstoffplatte mit einer Pinzette, kühlen Sie 10 Minuten in der großen Eisbox ab, zentrifizieren Sie sie in der Handtasche und legen Sie sie dann in einen -20 ° C-Kühlschrank zur Ersatzaufbewahrung.

Hinweis: Der Klysat kann auch nach Bedarf verwendet werden, um den Klysat oder den Zelllysat zu entfernen.

2, Adhesive Zellproteinextraktion (der Zellproteingehalt beträgt in der Regel etwa 1x10-9mg / Zelle)

1) Notwendige Ausrüstung: Eismaschine, Zellrascher, Markierstift, zwei Sätze von 1,5 ml EP-Röhren (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), zwei große Eisboxen, Handschuhe, eine Kulturflasche voller Zellen, PBS, das in einem 4 ° C-Kühlschrank aufbewahrt wird, Tri-Disruptionslösung, Benzylsulfonatfluor (PMSF, ein Protease-Inhibitor, stark giftig), Pipette, Saugkopf (Hochtemperatur-Hochdruckbehandlung), Filterpapier, Zentrifuge, Becher, 4 x SDS-Gelpuffer, Disulfoglykol (DTT), Schaumstoffplatte.