Cell Counting Kit-8 Zellprogrammtest

Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

Artikelnummer: C6005M

Produktspezifikationen: 500T

Lagerbedingungen:4℃Lichtschutz, langfristige Lagerung-20℃，Gültigkeitsdauer Verpackung.

Produktvorstellung:

Zellzählkit-8kurzCCK8(oderWST-8Die Kit ist eine aufWST-8Chemischer Name:2-(2-Methoxy-4-Nitrophenyl)-3-(4-Nitrophenyl)-5-(2,4-Disulfonbenzen-2H-Tetrazol mononatriumsalz) Farbgebung Reaktionen sind weit verbreitet in der schnellen hochempfindlichen Detektion Kits für Zellprogramm und Zytotoxizität.

WST-8Arbeitsprinzip: Unter den Bedingungen der Anwesenheit von Elektronenkopplungsreagenzien kann eine Dehydrogenase im Mitochondrium reduziert werden, um ein hochwasserlösliches orangefarbenes, gelbes Erzstoffprodukt zu erzeugen (Formazan). Die Farbe ist proportional zur Zellverpflanzung und umgekehrt zur Zytotoxizität. Verwendung von Enzymen in450 nmWellenlängenmessungODDer Wert spiegelt indirekt die Anzahl lebender Zellen wider.

WST-8Ja.MTTein Upgrade-Ersatzprodukt undMTToder sonstMTTÄhnliche Produkte wieXTTundMTSEs gibt offensichtliche Vorteile im Vergleich. Zunächst:MTTDie durch einige Dehydrogenase-Reduktionen in den Mitochondrien erzeugte Methanol ist nicht wasserlöslich und benötigt eine spezifische Lösung, um sie zu lösen; UndWST-8undXTTundMTSDie erzeugten Panzer sind wasserlöslich und können spätere Lösungsschritte vermeiden. Zweitens:WST-8Erzeugte RüstungsverhältnisseXTTundMTSDie entstehende Rüstung ist leichter auflösbar. Nochmals.WST-8alsXTTundMTSStabiler ist das Ergebnis des Experiments. Außerdem,WST-8undMTTundXTTBreiter als der lineare Bereich und höhere Empfindlichkeit.

CCKDie Methode wird weit verbreitet in den Bereichen Drogenscreening, Zellproduktionstest, Zytotoxizitätstest, Tumorensensitivitätstest und Aktivitätstest von Biofaktoren.

Verwendung:

1. Testen der Zellaktivität

（1(in der96 Impfung der Zellsuspension in der Bohrplatte (100 μL/Loch), empfohlen kann eingestellt werden8 Zellen Konzentration Gradient, jede Konzentration Einstellung6 Wiederholung der Zellplatten, z. B. nach der Anzahl der Zellen0/312,5/625/1250/2500/5000/10000/20000 Zellen/96Bohrplatten werden beschichtet. Kultivplatte über Nacht in der Kultivkammer legen (37℃,5 % CO2).

（2Zu jedem Loch hinzufügen10 μL CCKLösung (Achten Sie darauf, keine Blasen in den Löchern zu erzeugen, sie können beeinflussenODWerte zu lesen). Hinweis: Wenn das Produkt ausgelöst wird, kann37℃Wasserbad Behandlung beeinträchtigt nicht die Verwendung.

（3Inkubieren Sie die Platte in der Kultivkammer0,5 - 4 StundenHinweis: Das erste Experiment kann in0.5、1、2 und4 StundenAnschließend werden sie jeweils mit einem Enzym-Skalierer untersucht und dann ein Zeitpunkt für den nachfolgenden Experiment ausgewählt, an dem der Absorptionsbereich am besten geeignet ist.

（4Mit einem Enzym-Maßstab bestimmt450 nmund600 nm(Beseitigung von Störungen des Bodens der Bohrplatte). （5Wenn vorübergehend nicht festgelegtODWerte, die jedem Loch hinzugefügt werden können10 μL 0,1 MderHClLösung oder1 % w/v SDSLösung und Kulturplatte unter Raumtemperatur aufbewahren, um Licht zu vermeiden.24 StundenBei innerer Messung ändert sich die Absorption nicht.

2. Zellproduktion - Toxizitätstest

（1(in der96 Impfung im Loch100 μLZellsuspension, empfohlen kann eingestellt werden8 Zellen Konzentration Gradient, jede Konzentration Einstellung6 Wiederholung der Zellplatten, zum Beispiel nach der Anzahl der Zellen0/312,5/625/1250/2500/5000/10000/20000 Zellen/96Bohrplatten werden beschichtet. Kultivplatte über Nacht in der Kultivkammer legen (37℃, 5%CO2）

（2(Zu der Kultivplatte hinzufügen)1 bis 10 μLspezifische Medikamente stimulieren.

（3Inkubieren Sie eine gewisse Zeit in der Küche (z.B.:6、12、24 oder48 Stunden).

（4Zu jedem Loch hinzufügen10 μL CCKLösung (Achten Sie darauf, keine Blasen in den Löchern zu erzeugen, sie können beeinflussenODWerte zu lesen). Hinweis: Wenn das Produkt ausgelöst wird, kann37℃Wasserbad Behandlung beeinträchtigt nicht die Verwendung.

（5Inkubieren Sie die Platte in der Kultivkammer0,5 – 4 StundenHinweis: Das erste Experiment kann in0.5、1、2 und4 StundenAnschließend werden sie jeweils mit einem Enzym-Skalierer untersucht und dann ein Zeitpunkt für den nachfolgenden Experiment ausgewählt, an dem der Absorptionsbereich am besten geeignet ist.

（6Mit einem Enzym-Maßstab bestimmt450 nmund600 nm(Beseitigung von Störungen des Bodens der Bohrplatte).

（7Wenn vorübergehend nicht festgelegtODWerte, die jedem Loch hinzugefügt werden können10 μL 0,1 MderHClLösung oder1 % w/v SDSLösung und Abdeckung der Platte vor Licht unter Raumtemperatur aufbewahren.24 StundenBei innerer Messung ändert sich die Absorption nicht.

Hinweis: Wenn die zu prüfende Substanz oxidativ oder reduktiv ist, kannCCKBevor Sie ein frisches Medium ersetzen (das Medium entfernen und die Zellen zweimal mit dem Medium waschen und dann ein neues Medium hinzufügen), entfernen Sie die Wirkung des Medikaments. Natürlich kann in Fällen, in denen die Wirkung des Arzneimittels relativ gering ist, das Medium nicht ersetzt werden und die Absorption von Leeren nach dem Hinzufügen des Arzneimittels direkt in das Medium abgezogen werden.

3. Berechnungsformel

Überlebensrate der Zellen=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]xUnterdrückungsrate=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]xAls:Experimentelle Löcher(Kulturmittel, das Zellen enthält,CCK-8Testmedikamente)AbsorptionsgradAC:Kontrolllöcher(Kulturmittel, das Zellen enthält,CCK-8Keine zu testenden Medikamente)AbsorptionsgradAb:Leeres Loch(Kulturmedien ohne Zellen und zu testende Medikamente,CCK-8)Absorptionsgrad

Hinweise

1. Bitte zentrifizieren Sie das Produkt vor der Verwendung sofort auf den Rohrboden und führen Sie anschließende Experimente durch.

2. verwenden96Das Loch wird durch Zellplatten durchgeführt, wenn die Kultivzeit länger ist, müssen Sie auf das Problem der Verdunstung achten. Es wird empfohlen, den Umkreis zu verzichten und die gleiche Menge zu ersetzen.PBSWasser oder Kulturflüssigkeit.

3. Stellen Sie sicher, dass keine Blasen in jedem Loch vorliegen, bevor Sie mit einem Enzym-Calibrator testen, sonst wird die Messung beeinträchtigt.

4. Dieses Produkt ist für wissenschaftliche Zwecke beschränkt und darf nicht zur klinischen Diagnose oder Behandlung verwendet werden, nicht für Lebensmittel oder Medikamente verwendet werden und nicht in gewöhnlichen Wohnhäusern aufbewahrt werden.

5. Aus Gründen Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte experimentelle Anzüge und Einweghandschuhe.