Originalzellen von Ratten

Originalzellen von RattenÜbertragungsmethode:

I. Verdauungstechnik der Wandzellen

Entfernen oder ausgießen Sie die alte Kulturflüssigkeit in der Flasche.

2. Fügen Sie etwa 1 ml Verdauungsflüssigkeit (mit EDTA-Mischung) hinzu und schütteln Sie die Kulturflasche sanft, so dass die Flaschenbodenzellen in die Lösung eintauchen.

3, Verdauung nach 2-5 Minuten, die Kulturflasche unter dem Mikroskop zu beobachten, fand heraus, dass die ursprüngliche Wand Zellen allmählich zu runden neigen, noch nicht schweben, verdauungsflüssigkeit zu entfernen, die Kulturflüssigkeit hinzufügen, um die Verdauung zu beenden.

4, mit einer Sauge, die Zellen, die an der Wand geblasen sind, in eine Suspension zu blasen, in zwei bis drei weitere Kulturflaschen zu impfen und in einer 37 ° C-Kultivkammer fortzusetzen. Am nächsten Tag beobachten Sie das Wachstum.

II. Übertragung von suspendierten Zellen

1. Direkte Übertragung

1) Lassen Sie die suspendierten Zellen langsam auf dem Boden der Flasche absetzen und saugen Sie 1/2-2/3 der oberen Reinigung ab.

2) Nach dem Schlagen der Zellsuspension mit einer Sauge in zwei bis drei weitere Kulturflaschen, die in einem 37 ° C-Kulturraum kultiviert werden.

2. Zentrifugalübertragung

1) Übertragen Sie die Zellen zusammen mit der Kulturflüssigkeit in ein Zentrifugerrohr und zentrifizieren Sie 800-1000 rpm für 5 Minuten.

2) Entfernen Sie die obere Reinigung, fügen Sie eine neue Kulturflüssigkeit in einem Zentrifugerrohr hinzu und blasen Sie es mit einem Saugerrohr, um eine Zellsuspension zu bilden.

3) Die Zellsuspension wird in zwei bis drei weitere Kulturflaschen injiziert und in einer 37 ° C-Kultivkammer kultiviert.

Originalzellen von RattenFünf häufige Fehler in der Ausbildung

Fehler 1:Ein kleines Röhrchen der Primärzellen für eine Weile im Wasserbad aufgefroren

Korrektur 1: Die Urzellen sind sehr empfindlich für den Auftauprozess, daher ist es wichtig, die Flasche in ein 37 ° C-Wasserbad zu setzen, zu halten und sanft zu drehen, bis der Inhalt gerade aufgefroren ist. Die Flasche sollte dann sofort aus dem Wasserbad entfernt und auf den sterilen Arbeitstisch übertragen werden. Stellen Sie sicher, dass Ihre Kulturflasche bereit ist, bevor sie aufgefroren wird, so dass sie sofort für die Impfung von Zellen verwendet werden kann und in eine Kulturbox platziert wird.

Fehler 2:Direkte Zentrifugierung der Urzellen nach dem Auffrieren der Flasche

Korrektur 2:Wir empfehlen nicht, die Zellen nach dem Auftauten zu zentrifugieren, da das Zentrifugierverfahren schädlicher ist als kleine Mengen an DMSO-Rückständen. Denken Sie daran, das Medium am nächsten Tag nach der Wiederherstellung der ursprünglichen Zellen zu ersetzen, um alle verbleibenden DMSO zu entfernen.

Fehler 3:Ermöglicht, dass die ursprünglichen Zellen zu fusioniert werden

Korrektur 3:Wenn sie auf 100 convergieren, können die ursprünglichen Zellen altern. Denken Sie daran, dass die ursprünglichen Zellen nicht 100 rein sind, daher ist es wichtig, das Wachstum der verunreinigten Zellen zu minimieren. Wir empfehlen, eine Transplantationskultur der Originalzellen durchzuführen, wenn die Zellen eine Fusion von 90-95% erreichen.

Fehler 4:Die ursprünglichen Zellen können leicht wieder eingefroren werden.

Korrektur 4:Normalerweise empfehlen wir nicht, die ursprünglichen Zellen neu einzufrieren, da dies das Altern der Zellen fördern und / oder zu funktionellen Veränderungen führen kann. Die ursprünglichen Zellen sind sehr empfindlich und das Neueinfrieren kann zu Zelltod oder -schäden führen.

Fehler 5:Urzellen können sich unbegrenzt vermehren

Korrektur 5:Im Gegensatz zu Zelllinien haben die Primärzellen eine begrenzte Amplifikationsfähigkeit. Wir empfehlen, so früh wie möglich die Verwendung von Urzellen für Experimente, um genetische Drift zu verhindern. Darüber hinaus sollten Sie, wenn Sie einen Zelltyp verwenden, der schwierig ist, den Wert hinzuzufügen, die Zellmormologie genau überwachen, da kleine Mengen von gemischten Zellen (wie Fibrozyten) im Laufe der Zeit zu großen Mengen wachsen können und somit zu primären Zellen werden.