menschliche Hirnfibrozyten

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die menschliche Gehirnfaser wird vom Gehirngewebe getrennt; Das Gehirn ist in zwei Hemisphären unterteilt, und die Gehirnbarkeit (Graue Substanz) bedeckt den größten Teil jeder Gehirnhemisphäre und ist der Ort, an dem sich die Nervenzellen konzentrieren. Im Inneren besteht weiße Substanz aus Nervenfasern oder Myelin. Jede Halbkugel hat drei Seiten, nämlich die Außenseite (die etwa die gesamte Kortikalfläche ausmacht).1/3), Innenseite und Unterfläche (2/3 der Fläche); Auf der Oberfläche der Hemisphäre gibt es viele ungleich tiefe Gräben oder Spalten, die zwischen den Gräben oder Spalten aufgehoben werden, die die Oberfläche des Gehirns erheblich erhöhen; Wichtige Grenzen auf der äußeren Seite des Gehirns sind die Grenzen auf der äußeren Seite des Gehirns, die Grenzen auf der Spitzenseite und die zentrale Grenze. Aufgrund der Trennung der drei Trennungen ist die Gehirnbarkeit in die vier größten Teile der frontalen, oberen, temporalen und kissenloben aufgeteilt. Fibroblasten (Fibroblasten) sind die wichtigsten zellulären Bestandteile des porosen Bindegewebes, die durch die Differenzierung von Mesochiliozellen während der embryonalen Periode entstehen; Die Fibrozellen sind größer, klar konturiert, meist eine ausgeprägte spindelförmige oder sternförmige flache Struktur, deren Zellkern regelmäßig kreisförmig ist, der Kern ist groß und offensichtlich. Die funktionelle Aktivität der Fibrozellen ist stark, das Zytoplasma ist alkalisch schwäch und hat eine offensichtliche Proteinsynthese und Sekretionsaktivität, unter bestimmten Bedingungen kann es die gegenseitige Umwandlung mit den Fibrozellen erreichen; Fibrozyten spielen eine wichtige Rolle bei der Reparatur von Zelldegeneration, Nekrot und Gewebedefekten in verschiedenen Graden. Die kürzlich isolierten cerebrogenen Fibrozellen sind rund, gut brechend und suspendiert im Medium. 30min Zellen kleben an die Wand, von denen Teile beginnen, die Scheifen zu strecken, die sich als kleine Ansprünge manifestieren; Nach 6h ist die Zelle grundlegend an der Wand wanvoll, streckt sich in einer Schaufel, der Zellkern ist klar, gleichmäßiger verteilt, verstreut im Wachstum, nicht aggregiert; Die Zellen wachsen schnell, 5-7 Tage sind im Zustand der Fusion, die Zellen sind eng angeordnet, einige überlappen sich, flach, der Zellkörper ist größer, das Zytoplasma ist transparent, der Zellkern ist größer, oval und hell. Zellen verschmelzen und miteinander zu einem Netz verbinden; Die Zellen weisen eine flache Verteilung in der Form eines herausstehenden Spindels oder Sternes auf.
Methodenbeschreibung:

Firma Labor Isolierung von menschlichen Gehirnfasern AdoptionYi Protease-Kollagen-Mischverdauungsmethode in Kombination mit der Differenzialklebemethode hergestellt, die Gesamtzellmenge ist etwa 5 x 10. Zellen und Flaschen.
Qualitätsprüfung:

Firma Labor Isolierung menschlicher HirnfibromeVimentin ist immunfluoreszierend und kann bis zu 90% rein sein und enthält keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze.

Kulturmedium enthältFBS、 Wachstumsstoffe, Penicillin, Streptomycin usw.

Wechselfrequenz jeder2-3 Tage Wechsel

Wachstumsmerkmale Wandkleben

Zellmorm Fibrozellen ähnlich

Übertragungseigenschaften ÜbertragbarRund fünf Generationen; Zustand innerhalb von 3 Generationen

Verdauungsflüssigkeit 0,25 % Yi Protease

Aufbaubedingungen Gas: Luft,95%； CO2, 5 Prozent

Vorbereitung

1. Vorbereitung der Experimentausrüstung: Bereiten Sie sterile Petrischalen, Kulturflaschen, Pipetten, Zentrifugen, chirurgische Geräte usw. vor und führen Sie eine Hochdrucksterilisierung oder andere geeignete Desinfektionsbehandlung durch.

2. Vorbereitung von Reagenzien: Herstellung oder Kauf geeigneter Medien, Verdauungsenzyme (z. B. Kollagen usw.), Rinderserum, Dual Antibody und anderer Reagenzien, um sicherzustellen, dass sie steril und innerhalb der Gültigkeitsdauer sind.

3. Versuchstier oder Gewebequelle Vorbereitung: entsprechend den Versuchsbedürfnissen, die Auswahl der geeigneten Tiere und die entsprechende Anästhesie oder Hinrichtung, um das gewünschte Gewebe zu erhalten; Oder Organisationen aus einer vorhandenen Organisationsmodellbibliothek abrufen.

Entnahme und Bearbeitung

1. Entfernen Sie unter sterilen Bedingungen das Zielgewebe schnell, um die Gewebeschäden zu minimieren und überschüssiges Fett, Bindegewebe und andere nicht-Zweckgewebe zu entfernen.

Reinigung: Das entnommene Gewebe wird mehrmals mit vorgekühltem sterilen PBS gespült, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

3. Schneiden: Schneiden Sie das Gewebe in kleine Stücke von ca. 1 - 2 mm³ für die spätere Verdauung.

Zelltrennung

1. Verdauung: Die geschnittenen Gewebeblöcke werden in eine Zentrifuge mit einer angemessenen Menge an Verdauungsenzymen gelegt und für eine Weile in einem 37 ° C-thermostatischen Schüttelbett oder in einem Kulturkasten verdaut. Die Zentrifugerrohre können während der Zeit sanft geschüttelt werden, um die Verdauung gleichmäßiger zu machen.

2. Beenden der Verdauung: Wenn die Gewebeblöcke zum größten Teil in eine Einzelzellsuspension oder kleine Zellruppen verdaut werden, beendet die Verdauung durch das Hinzufügen eines serumhaltigen Mediums.

3. Filtern und Zentrifugieren: Filtern Sie die Zellsuspension mit einem Zellsieb, entfernen Sie unverdautes Gewebefragment und zentrifugieren Sie das Filter mit der richtigen Drehzahl, um die Zellalfällung zu sammeln.

Zellenbeobachtung und -prüfung

1. Tägliche Beobachtung: Täglich mit dem umgekehrten Mikroskop beobachten Sie die Zellmorm, den Wachstumszustand, die Dichte usw., um die Veränderungen der Zellen aufzuzeichnen, wie die Entdeckung von Zellverkontamination oder Anomalien, und rechtzeitig entsprechende Maßnahmen zu ergreifen.
2. Zellzählung und Vitalitätstest: Bei Bedarf können Zellzählungen und Vitalitätstest mit Methoden wie Taipanblau gefärbt werden, um das Wachstum und den Gesundheitszustand der Zellen zu verstehen.

1. Interview und Trennung

1. Schneller Betrieb

- Das Gewebe muss sofort nach der Entnahme verarbeitet werden, um eine langfristige Exposition an Raumtemperatur oder einer nicht nährstoffreichen Umgebung zu vermeiden.

- Spülen Sie das Gewebe mit sterilem PBS oder physiologischem Salzwasser, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

2. Auswahl der Verdauungsenzyme

- Wählen Sie die Verdauungsenzyme je nach Gewebetyp, um zu vermeiden, dass übermäßige Verdauung zu Zellschäden führt.

Die Verdauungszeit muss streng kontrolliert werden (in der Regel 10-30 Minuten) und der Zustand der Zellallösung kann über ein Mikroskop beobachtet werden.

2. Optimierung der Anbaubedingungen

1. Auswahl des Mediums

Bei Verwendung von Medien, die Serum oder spezifische Wachstumsfaktoren enthalten (wie DMEM, RPMI 1640 usw.), müssen einige Zellen Insulin, EGF usw. hinzufügen.

- Vermeiden Sie den häufigen Austausch von Medium-Marken oder Chargen, um den Anpassungsstress der Zellen zu reduzieren.

2. Wand und Übertragung

- Die Fähigkeit der primären Zellen zu kleben ist schwach und kann verpackt werden, um Petri-Schalen (wie Kollagen, Polylysin) zu benötigen.

- Bei der Übertragung wird empfohlen, die Dichte bei 70% -80% zu kontrollieren, und übermäßige Konvergenz kann zu einer Kontaktunterdrückung und Differenzierung führen.

III. Verschmutzungskontrolle

1. Steriler Betrieb

- Der gesamte Betrieb auf dem Supernet-Tisch, die Verwendung von Einweg-Verbrauchsmaterialien, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden.

- Dual Antibody kann dem Medium hinzugefügt werden, aber langfristige Anwendung kann die Zellaktivität beeinflussen.

2. Branchenprüfung

- Regelmäßige Erkennung von Branchen-Kontaminationen (z. B. PCR-Methode), die Zellen müssen rechtzeitig nach der Kontamination entsorgt werden.

4. Zustandsüberwachung

1. Tägliche Beobachtung

Prüfen Sie täglich die Zellmorm, Dichte und Mediumfarbe und wechseln Sie das Medium rechtzeitig (in der Regel alle 2-3 Tage).

Anomale Morphologie (z. B. Zellrundung, Zunahme von Fragmenten) kann auf Verschmutzung oder Mangel an Nährstoffen hinweisen.

2. Übertragung und Einfrieren

Eine begrenzte Anzahl von Zellteilungen (in der Regel 5-10 Generationen) erfordert eine rechtzeitige Einfrierung der frühen Generationen.

- Die Gefrierflüssigkeit wird empfohlen, DMSO + Serum (oder spezielles Gefriermedium) zu verwenden und nach einer gradienten Abkühlung flüssigen Stickstoff zu speichern.