Fluoreszenz-Quantifizierung RT-PCR-Kit für Hepatitis-Virussonde bei Mäusen Zellstamm

[Produktname]Fluoreszenz-Quantifizierung durch Hepatitis-Virus-Sondemethode bei Mäusen RT-PCR-Kit

Name：MausHepatitisvirus(MHV)ProbegRT-PCRKit

[Verpackungsspezifikationen]50 Mal / Box

【Erwartungszweck)Hepatitis-Virus bei Mäusen(MouseHepatitisVirus, MHV) ist ein RNA-Virus, das Virus befindet sich im Blut und im Inneren, insbesondere in der Leber und den Nieren, auch im Fekal zu sehen, ist hoch ansteckend für Mäuse, Mäusenhepatitis ist eine Art von Infektionskrankheit, die durch MHV verursacht wird, giftige Mäuse verteilt, aber unter normalen Umständen ist die Infektion meistens unbedeutend, kann nur unter Stressfaktoren eine tödliche Krankheit werden, hauptsächlich für Hepatitis und Enzephalitis, daher hat die schnelle genaue Identifizierung des Hepatitis-Virus der Mäuse eine wichtige Rolle bei der Prävention und Quarantäne der Krankheit. Dieses Produkt ist ein speziell entwickeltes Kit zur Detektion von Hepatitis-Viren in Mäusen, das auf der Grundlage der Sondenfluoreszenz-quantitativen RT-PCR-Technologie entwickelt wurde. Es hat die folgenden Eigenschaften:

1. Wenn Sie es öffnen, müssen Sie nur eine Probe-RNA-Vorlage bereitstellen.

2. Der Leiter und die Sonde sind optimiert und empfindlich.

3. Positive Kontrolle zur Verfügung stellen, um falsch negative Proben zu unterscheiden.

Hohe Spezifizität, der Vorläufer ist auf der Grundlage einer hochkonservativen Region des Hepatitis-Virus der Mäuse konzipiert und reagiert nicht mit der RNA anderer Viren.

5. Dieses Produkt ist ausreichend für 50-mal 20 μL-System Sondenfluoreszenz quantitative RT-PCR-Reaktion.

Dieses Produkt darf nur zur wissenschaftlichen Forschung verwendet werden.

[Spezifikationen und Komponenten]

【Transport und Lagerung]Tieftemperaturtransport,-20 ° C aufbewahren, die Aufbewahrungsdauer ist 12 Monate.

【Eigenes Reagenz]Proben RNa.

Fluoreszenz-Quantifizierung RT-PCR-Kit für Hepatitis-Virus-Sondemethode bei Mäusen[Verwendung]I. Verdünnung der Standardkurvenprobe (Nehmen wir die 6 10-fachen Verdünnungen von 10E2-10E6-Kopien / μL als Beispiel) Da die Standardkonzentration sehr hoch ist, müssen die folgenden Verdünnungsvorgänge in einem unabhängigen Bereich durchgeführt werden und die Probe oder andere Bestandteile dieses Kits nicht verschmutzen. Um die Stabilität des Produkts zu erhöhen und die Verbreitung von infektiösen Pathogenen zu vermeiden, liefert dieses Produkt keine lebenden Proben als positive Kontrolle, sondern nur nicht-infektiöse DNA-Fragmente als positive Kontrolle.

1. Markieren Sie 6 Zentrifugerrohre, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. Fügen Sie jeweils 45 μL fluoreszierende PCR-spezielle Schablonenverdünnung mit einem Kernpistolkopf hinzu (vorzugsweise mit einem Kernpistolkopf).

3. Fügen Sie eine positive Kontrolle von 5 μL 1 × 10E7 Kopien / μL (Kit zur Verfügung gestellt) in die Röhre 6 und schütteln Sie vollständig für 1 Minute, um eine Standardkurve von 1 × 10E6 Kopien / μL zu erhalten. Auf Eis setzen.

4. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie eine positive Kontrolle von 5 μL 1 × 10E6 Kopien / μL in die Röhre 5 hinzu (das Ergebnis der vorherigen Verdünnung), schütteln Sie 1 Minute vollständig und erhalten Sie eine Standardkurvenprobe von 1 × 10E5 Kopien / μL. Auf Eis setzen.

5. Wechseln Sie den Pistolenkopf, fügen Sie eine positive Kontrolle von 5 μL 1 × 10E5 Kopien / μL (das Ergebnis der vorherigen Verdünnung) in die Röhre 4 hinzu, schütteln Sie 1 Minute vollständig und erhalten Sie eine Standardkurvenprobe von 1 × 10E4 Kopien / μL. Auf Eis setzen.

Wiederholen Sie den obigen Vorgang, bis Sie eine Standardkurvenprobe mit sechs Verdünnungsgraden erhalten haben. Auf Eis verwenden.

2. Proben die RNAVorbereitung

7 . Wenn es N Proben gibt, ist es am besten, N + 2 Extraktionen einzustellen, von denen eine PC (Probenvorbereitung für positive Kontrolle) und eine NC (Probenvorbereitung für negative Kontrolle) ist. Die 10.000-fache Verdünnung, die mit 10 μL positiv kontrolliert werden kann, plus eine bestimmte Menge Wasser, macht das Gesamtvolumen das gleiche wie das erforderliche Volumen für jede Zubereitung als PC. Wasser wird als NC verwendet.

8 . Reinigung der RNA der Probe nach eigener Wahl. Dieses Kit ist kompatibel mit den meisten Virus-RNA-Extraktion-Kits auf dem Markt.

dreiProbeqRT-PCR-Reaktion(20 μL-System, im Probenvorbereitungsraum durchgeführt)

9 . Wenn eine quantitative Analyse durchgeführt wird und nur eine Wiederholung durchgeführt wird, werden N + 9 PCR-Röhrchen markiert, davon N + 2 für die zuvor erhaltenen N + 2-Proben, 1 für die PCR-negative Kontrolle (mit Wasser als Vorlage) und 6 für die Standardkurve. Wenn eine qualitative Analyse durchgeführt wird und nur eine Wiederholung durchgeführt wird, markieren Sie N + 4 PCR-Röhre, davon N + 2 für die zuvor erhaltenen N + 2-Proben, 1 für die PCR-negative Kontrolle (mit Wasser als Vorlage) und 1 für die PCR-positive Kontrolle (mit der positiven Kontrollverdünnung in Röhre 4 als Vorlage). Im Folgenden werden nur quantitative Analysen beschrieben.

10 . Drücken Sie die Tabelle unten, um die einzelnen Inhaltsstoffe in die Markierungsröhre hinzuzufügen (in dieser Tabelle ist nur eine Wiederholung aufgeführt. Die positive Kontrolle wird erst eingestellt, wenn die Probe und die negative Kontrolle eingestellt sind, und die positive Kontrolle wird erst zugefügt, bis alle Proben auf dem Deckel gelagert sind)

11.Nachdem Sie den Deckel abgedeckt haben, folgen Sie den folgenden ParameternqRT-PCR:

4. Datenverarbeitung

12. Wenn diese Kit für die quantitative Detektion verwendet wird, wird die Standardkurve mit dem Logwert der positiven Kontrollkonzentration als horizontale Achse und dem Ct-Wert als vertikale Achse gezeichnet. Dann wird der Ct-Wert der Probe aus der Standardkurve berechnet, um den Logwert der RNA-Konzentration der Probe zu berechnen.

13 . Wenn diese Kit für qualitative Tests verwendet wird und nur positiv oder negativ beurteilt wird, muss die negative Kontroll Ct größer oder gleich 40 sein. Die positive Kontrolle muss ein Fluoreszenz-Logarithmus-Wachstum haben, eine typische Verstärkungskurve haben, und der Ct-Wert sollte kleiner oder gleich 30 sein. Die Probe ist negativ, wenn ihre Ct größer oder gleich 40 ist, und positiv, wenn sie kleiner oder gleich 35 ist. Wenn es zwischen 35 und 40 ist, wiederholen Sie es. Der Ct-Wert des wiederholten Experiments ist negativ, wenn er größer oder gleich 40 ist, und positiv, wenn er kleiner als 35 ist.