Menschliche Lungenmikrovaskuläre Endotelzellen

Alle Produkte des Unternehmens sind ausschließlich für wissenschaftliche Experimente und nicht für andere wissenschaftliche Experimente!

Lungenmikrovaskuläres Endotel von Lungengewebe getrennt; Die Lunge ist das Atemorgan des Körpers, das sich in der Brust befindet, links und rechts, oberhalb des Herzens bedeckt. Die Lunge hat fünf Blätter, zwei links und drei rechts. Das Lungen-Lungensystem (bezieht sich auf die Atemrohre, Bronchen usw.) ist mit der Kehle und der Nase verbunden, daher wird die Kehle als das Tor der Lunge bezeichnet und die Nase als das außere Tor der Lunge. Mikrovaskuläre Endotelzellen sind eng an einer Reihe physiologischer und entzündlicher Reaktionen beteiligt, darunter Regeneration, Entwicklung und Wundheilung. Die Zellen sind schiebelförmig oder mehreckig, nach der Bildung einer Schicht sind sie kieselsteinartig oder asfaltsteinartig angeordnet. Lungenmikrovaskuläre Endotelzellen bilden eine semiselektive Barriere, die für den Austausch von Lungengasen und die Regulierung des Flusses von Flüssigkeiten und löslichen Lösungen zwischen Blut und Lungenmittel wichtig ist.

Methodenbeschreibung:

Das menschliche Lungenmikrovaskuläre Endotel, das im Labor isoliert wurde, wurde durch die Gewebe-Plaster-Methode und in Kombination mit der Endotelzell-spezifischen Medienkultur-Screening vorbereitet, mit einer Gesamtzellmenge von etwa 5 x 105 Zellen / Flasche.

Qualitätsprüfung:

Der menschliche Lungenmikrovaskuläre Endotel, der im Labor isoliert wurde, wurde durch CD31-Immunfluorescenz identifiziert und kann bis zu 90% rein sein und enthält keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze.

Paket unter BedingungenPLL (0,1 mg/ml) oder Gelatine (0,1%)

KulturmediumEnthält FBS, Wachstumsstoffe, Penicillin, Streptomycin usw.

WechselfrequenzWechseln Sie alle 2-3 Tage

WachstumsmerkmaleWandkleben

ZellmormEndothelzellen

ÜbertragungseigenschaftenÜbertragbar für 2-3 Generationen

Verdauungsflüssigkeit0.25%

Vorbereitung

1. Vorbereitung der Experimentausrüstung: Bereiten Sie sterile Petrischalen, Kulturflaschen, Pipetten, Zentrifugen, chirurgische Geräte usw. vor und führen Sie eine Hochdrucksterilisierung oder andere geeignete Desinfektionsbehandlung durch.

2. Vorbereitung von Reagenzien: Herstellung oder Kauf geeigneter Medien, Verdauungsenzyme (z. B. Kollagen usw.), Rinderserum, Dual Antibody und anderer Reagenzien, um sicherzustellen, dass sie steril und innerhalb der Gültigkeitsdauer sind.

3. Versuchstier oder Gewebequelle Vorbereitung: entsprechend den Versuchsbedürfnissen, die Auswahl der geeigneten Tiere und die entsprechende Anästhesie oder Hinrichtung, um das gewünschte Gewebe zu erhalten; Oder Organisationen aus einer vorhandenen Organisationsmodellbibliothek abrufen.

Entnahme und Bearbeitung

1. Entfernen Sie unter sterilen Bedingungen das Zielgewebe schnell, um die Gewebeschäden zu minimieren und überschüssiges Fett, Bindegewebe und andere nicht-Zweckgewebe zu entfernen.

Reinigung: Das entnommene Gewebe wird mehrmals mit vorgekühltem sterilen PBS gespült, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

3. Schneiden: Schneiden Sie das Gewebe in kleine Stücke von ca. 1 - 2 mm³ für die spätere Verdauung.

Zelltrennung

1. Verdauung: Die geschnittenen Gewebeblöcke werden in eine Zentrifuge mit einer angemessenen Menge an Verdauungsenzymen gelegt und für eine Weile in einem 37 ° C-thermostatischen Schüttelbett oder in einem Kulturkasten verdaut. Die Zentrifugerrohre können während der Zeit sanft geschüttelt werden, um die Verdauung gleichmäßiger zu machen.

2. Beenden der Verdauung: Wenn die Gewebeblöcke zum größten Teil in eine Einzelzellsuspension oder kleine Zellruppen verdaut werden, beendet die Verdauung durch das Hinzufügen eines serumhaltigen Mediums.

3. Filtern und Zentrifugieren: Filtern Sie die Zellsuspension mit einem Zellsieb, entfernen Sie unverdautes Gewebefragment und zentrifugieren Sie das Filter mit der richtigen Drehzahl, um die Zellalfällung zu sammeln.

Zellenbeobachtung und -prüfung

1. Tägliche Beobachtung: Täglich mit dem umgekehrten Mikroskop beobachten Sie die Zellmorm, den Wachstumszustand, die Dichte usw., um die Veränderungen der Zellen aufzuzeichnen, wie die Entdeckung von Zellverkontamination oder Anomalien, und rechtzeitig entsprechende Maßnahmen zu ergreifen.
2. Zellzählung und Vitalitätstest: Bei Bedarf können Zellzählungen und Vitalitätstest mit Methoden wie Taipanblau gefärbt werden, um das Wachstum und den Gesundheitszustand der Zellen zu verstehen.

1. Interview und Trennung

1. Schneller Betrieb

- Das Gewebe muss sofort nach der Entnahme verarbeitet werden, um eine langfristige Exposition an Raumtemperatur oder einer nicht nährstoffreichen Umgebung zu vermeiden.

- Spülen Sie das Gewebe mit sterilem PBS oder physiologischem Salzwasser, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

2. Auswahl der Verdauungsenzyme

- Wählen Sie die Verdauungsenzyme je nach Gewebetyp, um zu vermeiden, dass übermäßige Verdauung zu Zellschäden führt.

Die Verdauungszeit muss streng kontrolliert werden (in der Regel 10-30 Minuten) und der Zustand der Zellallösung kann über ein Mikroskop beobachtet werden.

2. Optimierung der Anbaubedingungen

1. Auswahl des Mediums

Bei Verwendung von Medien, die Serum oder spezifische Wachstumsfaktoren enthalten (wie DMEM, RPMI 1640 usw.), müssen einige Zellen Insulin, EGF usw. hinzufügen.

- Vermeiden Sie den häufigen Austausch von Medium-Marken oder Chargen, um den Anpassungsstress der Zellen zu reduzieren.

2. Wand und Übertragung

- Die Fähigkeit der primären Zellen zu kleben ist schwach und kann verpackt werden, um Petri-Schalen (wie Kollagen, Polylysin) zu benötigen.

- Bei der Übertragung wird empfohlen, die Dichte bei 70% -80% zu kontrollieren, und übermäßige Konvergenz kann zu einer Kontaktunterdrückung und Differenzierung führen.

III. Verschmutzungskontrolle

1. Steriler Betrieb

- Der gesamte Betrieb auf dem Supernet-Tisch, die Verwendung von Einweg-Verbrauchsmaterialien, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden.

- Dual Antibody kann dem Medium hinzugefügt werden, aber langfristige Anwendung kann die Zellaktivität beeinflussen.

2. Branchenprüfung

- Regelmäßige Erkennung von Branchen-Kontaminationen (z. B. PCR-Methode), die Zellen müssen rechtzeitig nach der Kontamination entsorgt werden.

4. Zustandsüberwachung

1. Tägliche Beobachtung

Prüfen Sie täglich die Zellmorm, Dichte und Mediumfarbe und wechseln Sie das Medium rechtzeitig (in der Regel alle 2-3 Tage).

Anomale Morphologie (z. B. Zellrundung, Zunahme von Fragmenten) kann auf Verschmutzung oder Mangel an Nährstoffen hinweisen.

2. Übertragung und Einfrieren

Eine begrenzte Anzahl von Zellteilungen (in der Regel 5-10 Generationen) erfordert eine rechtzeitige Einfrierung der frühen Generationen.

- Die Gefrierflüssigkeit wird empfohlen, DMSO + Serum (oder spezielles Gefriermedium) zu verwenden und nach einer gradienten Abkühlung flüssigen Stickstoff zu speichern.