Menschliche Mikroglia

Alle Produkte des Unternehmens sind ausschließlich für wissenschaftliche Experimente und nicht für andere wissenschaftliche Experimente!

Isolierung der menschlichen Mikroglia vom Gehirngewebe; Das Gehirn ist in zwei Hemisphären unterteilt, die Gehirnbarkeit.(Graue Substanz) bedeckt den größten Teil jeder Gehirnhalbkugel und ist der Ort, an dem sich die Nervenzellen konzentrieren. Im Inneren besteht weiße Substanz aus Nervenfasern oder Myelin. Jede Halbkugel hat drei Seiten, nämlich die Außenseite (etwa 1/3 der gesamten Kortikalfläche), die Innenseite und die Unterfläche (2/3 der Fläche). Auf der Oberfläche der Hemisphäre gibt es viele ungleich tiefe Gräben oder Spalten, die zwischen den Gräben oder Spalten aufgehoben werden, die die Oberfläche des Gehirns erheblich erhöhen; Wichtige Grenzen auf der äußeren Seite des Gehirns sind die Grenzen auf der äußeren Seite des Gehirns, die Grenzen auf der Spitzenseite und die zentrale Grenze. Aufgrund der Trennung der drei Trennungen ist die Gehirnbarkeit in die vier größten Teile der frontalen, oberen, temporalen und kissenloben aufgeteilt. Mikroglia sind eine Art von Neurogliazellen, die Makrophagen im Gehirn und im Rückenmark entsprechen und die Hauptabwehrlinie des zentralen Nervensystems (ZNS) sind. Die Mikroglia machen etwa 20% der Neurozellen im Gehirn aus und beseitigen ständig beschädigte Nerven, Plaques und Infektionsstoffe aus dem zentralen Nervensystem. Unzählige klinische und neurologische Studien zeigen, dass aktivierte Mikrozellen eine wichtige Rolle bei der Entstehung neurodegenerativer Erkrankungen wie Parkinson, Multiple Sklerose und Alzheimer spielen. Allerdings können zu viele aktivierte oder außer Kontrolle geratene Mikroglia Neurotoxizität verursachen. Sie sind eine wichtige Quelle von entzündungsproventiven Faktoren und oxidativem Stress, wie Tumor Necroty Factor (TNF), Stickoxid, Intermedian und andere neurotoxische Substanzen. Hauptfunktion der Mikroglia: ① Neuroglia erscheint im Prozess der Transformation der frühen Gehirnentwicklung in das Reifenstadium; Wenn eine programmierte Zelle stirbt oder das zentrale Nervensystem während der Entwicklung des Gehirns beschädigt oder pathologisch beschädigt ist, kann die Glia als Makrophage des Gehirns dienen; Gliazellen können Antigene ausdrücken, wenn sie CD-4-positive T-Zellen in Gewebekompatibilitätskomplexen der Klasse II ausdrücken, Fc-vermittelte Makrophage ausführen und Antigene mit Blutbildungszellen und Makrophagegewebe teilen.
Methodenbeschreibung:

Das Labor des Unternehmens isolierte menschliche Mikroglia mit enzymatischer Verdauungsmethode in Kombination mit der Differential-Adhesive-Methode, nach mehreren Tagen des Nährstoffmangels des Kulturmediums durch Schüttelbettschockung, um fallende Zellen vorzubereiten, die Gesamtzellenzahl beträgt etwa5×10? Zellen und Flaschen.
Qualitätsprüfung:

Firma Labor Isolierung menschliche MikrogliaCD11b Immunofluoreszenz-Identifizierung, Reinheit bis zu 90% und enthält keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefe und Pilze.

Kulturmedium enthältFBS、 Wachstumsstoffe, Penicillin, Streptomycin usw.

Wechselfrequenz jeder2-3 Tage Wechsel

Wachstumsmerkmale Wandkleben

Zellmorm Schiebel, mehreckig

Übertragungseigenschaften gehört zu den terminalen Differenzierungszellen; Zu einer nicht proliferierenden Zellpopulation gehören

Verdauungsflüssigkeit Lidocaine (von 12mM)

Aufbaubedingungen Gas: Luft,95%； CO2, 5 Prozent

Vorbereitung

1. Vorbereitung der Experimentausrüstung: Bereiten Sie sterile Petrischalen, Kulturflaschen, Pipetten, Zentrifugen, chirurgische Geräte usw. vor und führen Sie eine Hochdrucksterilisierung oder andere geeignete Desinfektionsbehandlung durch.

2. Vorbereitung von Reagenzien: Herstellung oder Kauf geeigneter Medien, Verdauungsenzyme (z. B. Kollagen usw.), Rinderserum, Dual Antibody und anderer Reagenzien, um sicherzustellen, dass sie steril und innerhalb der Gültigkeitsdauer sind.

3. Versuchstier oder Gewebequelle Vorbereitung: entsprechend den Versuchsbedürfnissen, die Auswahl der geeigneten Tiere und die entsprechende Anästhesie oder Hinrichtung, um das gewünschte Gewebe zu erhalten; Oder Organisationen aus einer vorhandenen Organisationsmodellbibliothek abrufen.

Entnahme und Bearbeitung

1. Entfernen Sie unter sterilen Bedingungen das Zielgewebe schnell, um die Gewebeschäden zu minimieren und überschüssiges Fett, Bindegewebe und andere nicht-Zweckgewebe zu entfernen.

Reinigung: Das entnommene Gewebe wird mehrmals mit vorgekühltem sterilen PBS gespült, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

3. Schneiden: Schneiden Sie das Gewebe in kleine Stücke von ca. 1 - 2 mm³ für die spätere Verdauung.

Zelltrennung

1. Verdauung: Die geschnittenen Gewebeblöcke werden in eine Zentrifuge mit einer angemessenen Menge an Verdauungsenzymen gelegt und für eine Weile in einem 37 ° C-thermostatischen Schüttelbett oder in einem Kulturkasten verdaut. Die Zentrifugerrohre können während der Zeit sanft geschüttelt werden, um die Verdauung gleichmäßiger zu machen.

2. Beenden der Verdauung: Wenn die Gewebeblöcke zum größten Teil in eine Einzelzellsuspension oder kleine Zellruppen verdaut werden, beendet die Verdauung durch das Hinzufügen eines serumhaltigen Mediums.

3. Filtern und Zentrifugieren: Filtern Sie die Zellsuspension mit einem Zellsieb, entfernen Sie unverdautes Gewebefragment und zentrifugieren Sie das Filter mit der richtigen Drehzahl, um die Zellalfällung zu sammeln.

Zellenbeobachtung und -prüfung

1. Tägliche Beobachtung: Täglich mit dem umgekehrten Mikroskop beobachten Sie die Zellmorm, den Wachstumszustand, die Dichte usw., um die Veränderungen der Zellen aufzuzeichnen, wie die Entdeckung von Zellverkontamination oder Anomalien, und rechtzeitig entsprechende Maßnahmen zu ergreifen.
2. Zellzählung und Vitalitätstest: Bei Bedarf können Zellzählungen und Vitalitätstest mit Methoden wie Taipanblau gefärbt werden, um das Wachstum und den Gesundheitszustand der Zellen zu verstehen.

1. Interview und Trennung

1. Schneller Betrieb

- Das Gewebe muss sofort nach der Entnahme verarbeitet werden, um eine langfristige Exposition an Raumtemperatur oder einer nicht nährstoffreichen Umgebung zu vermeiden.

- Spülen Sie das Gewebe mit sterilem PBS oder physiologischem Salzwasser, um Blut und Verunreinigungen zu entfernen.

2. Auswahl der Verdauungsenzyme

- Wählen Sie die Verdauungsenzyme je nach Gewebetyp, um zu vermeiden, dass übermäßige Verdauung zu Zellschäden führt.

Die Verdauungszeit muss streng kontrolliert werden (in der Regel 10-30 Minuten) und der Zustand der Zellallösung kann über ein Mikroskop beobachtet werden.

2. Optimierung der Anbaubedingungen

1. Auswahl des Mediums

Bei Verwendung von Medien, die Serum oder spezifische Wachstumsfaktoren enthalten (wie DMEM, RPMI 1640 usw.), müssen einige Zellen Insulin, EGF usw. hinzufügen.

- Vermeiden Sie den häufigen Austausch von Medium-Marken oder Chargen, um den Anpassungsstress der Zellen zu reduzieren.

2. Wand und Übertragung

- Die Fähigkeit der primären Zellen zu kleben ist schwach und kann verpackt werden, um Petri-Schalen (wie Kollagen, Polylysin) zu benötigen.

- Bei der Übertragung wird empfohlen, die Dichte bei 70% -80% zu kontrollieren, und übermäßige Konvergenz kann zu einer Kontaktunterdrückung und Differenzierung führen.

III. Verschmutzungskontrolle

1. Steriler Betrieb

- Der gesamte Betrieb auf dem Supernet-Tisch, die Verwendung von Einweg-Verbrauchsmaterialien, um Kreuzverschmutzung zu vermeiden.

- Dual Antibody kann dem Medium hinzugefügt werden, aber langfristige Anwendung kann die Zellaktivität beeinflussen.

2. Branchenprüfung

- Regelmäßige Erkennung von Branchen-Kontaminationen (z. B. PCR-Methode), die Zellen müssen rechtzeitig nach der Kontamination entsorgt werden.

4. Zustandsüberwachung

1. Tägliche Beobachtung

Prüfen Sie täglich die Zellmorm, Dichte und Mediumfarbe und wechseln Sie das Medium rechtzeitig (in der Regel alle 2-3 Tage).

Anomale Morphologie (z. B. Zellrundung, Zunahme von Fragmenten) kann auf Verschmutzung oder Mangel an Nährstoffen hinweisen.

2. Übertragung und Einfrieren

Eine begrenzte Anzahl von Zellteilungen (in der Regel 5-10 Generationen) erfordert eine rechtzeitige Einfrierung der frühen Generationen.

- Die Gefrierflüssigkeit wird empfohlen, DMSO + Serum (oder spezielles Gefriermedium) zu verwenden und nach einer gradienten Abkühlung flüssigen Stickstoff zu speichern.