ES Targeted Technologie Dienstleistungen

Einer,ES Targeted Technologie DienstleistungenTechnische Definitionen und Grundprinzipien

ES Targeting TechnologieEs handelt sich um eine Methode zur Geneditzierung, die auf der Homogenen Rekombination von Embryonischen Stammzellen (ES) basiert und die Genknock-out (KO), bedingte Knock-out (CKO), Genknock-in (KI) und Punktmutationen (PM) ermöglicht. Zu den Grundprinzipien gehören:

1. Homogene Restrukturierungsmechanismus：

• Design enthältÄhnliche ArmeEin Träger (homogen mit dem Zielgen), der exogene Sequenzen (z. B. Screening-Markierungsgene) durch homogene Rekombination in den Zielort einfügt.

2. Positives und negatives Filtersystem：

• Markierungen werden gefiltert(z.B. Neo): Einfügen der Homogene Zone, um erfolgreich rekombinierte ES-Zellen zu screenen.

• Negative Filtermarken(z. B. HSV-tk/DTA): Zufällig eingesetzte Zellen werden außerhalb des homogenen Arms eliminiert.

3. Omnipotenz der embryonalen Stammzellen：

• Die modifizierten ES-Zellen wurden in die Zysten injiziert und entwickelten sich als chimerische Mäuse (F0), um ein stabiles genetisches Modell durch die Fortpflanzungslinientransmission zu erhalten.

Technische PositionierungES-Targeting ist der Goldstandard vor CRISPR, insbesondere fürGroße Bearbeitung(>10 KB) undKomplexe genetische Modifikationen(wie bedingte Löschung).

Zwei,ES Targeted Technologie DienstleistungenStandardisierte Betriebsprozesse und technologische Innovationen

(a) herkömmlicher ES-Zielverfahren (7-12 Monate)

Wichtige Schritte zur Analyse：

1. Träger-Konstruktion：

• Die homogene Armlänge beträgt in der Regel 3-5 kb und die Einführung großer Fragmente erfordert einen BAC-Träger.

2. ES Zelllinienauswahl：

• Häufig verwendete Produkte: 129S6/SvEvTac (hohe Umbaueffizienz), C57BL/6N (reiner Hintergrund).

3. Chimerische Vorbereitung：

• Die Chimerierung nach der Injektion von Zysten beträgt etwa 20-70% und muss intuitiv durch Haarmarker (z. B. Whitening-Gastgeber) gescreen werden.

Technologische Innovationen: EPS-Zellen

EPS Zellen(Extended Pluripotent Stem Cells) wurde 2017 von unseren Wissenschaftlern berichtet, deren Vorteile umfassen:

1. Effizienzsteigerung：

• Targeting Effizienz bis zu herkömmlichen ES-Zellen10-100 Mal.

2. Zyklus verkürzt：

• Chimeren wurden in einem Schritt erhalten, sparen 3 Monate Spezies-Übertragung.

3. Allmächtige Verbesserung：

• Durch die Injektion einer einzelnen Zelle können 99,99% der Chimeren erzeugt werden.