TALENS Tiermodell

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TALENs Tiermodell-Konstruktion ist ein experimentelles Tiermodell, das mit der Technik der TALENs-Genbearbeitung erstellt wurde. TALENs ermöglichen eine präzise Bearbeitung des Genoms durch die Fusion der DNA-Bindungsdomäne des Transkriptionsaktivierungsfaktor-ähnlichen Effekts (TALE) mit der Schnittdomäne der Nukleatase (FokI).

Produktdetails

TALENS Tiermodell

Technische Prinzipien und Kernbreche von TALENS

a) Strukturdesign und Wirkungsmechanismus

TALEN (Transcription Activator-Like Effector Nucleases) ist eineKünstlich entwickelte NukleataseEs besteht aus zwei Teilen:

DNA-Erkennungsdomäne (TALE-Protein)：

von34 wiederholte AminosäurenZusammensetzung, durch jede EinheitVariable Aminosäuren an Positionen 12 und 13 (RVDs)Spezifische Identifizierung einzelner Basen:

RVD Typ	Identifizierung der Basis	Kombinierte Stärke
NI	Ein	Hohe Spezifikation
NG	T	Hohe Spezifikation
HD	C	Hohe Spezifikation
NN	G/A	Kreuzerkennung

Die Länge der Sequenz ist in der Regel15-20 bpSicherstellung der Zieleinheit von Wei.

DNA-Schnittdomäne (FokI Nukleatase)：

Muss gebildet werdenDiomerUm die DNA zu schneiden, müssen die TALENs daher gepaart ausgebildet sein (linker und rechter Arm), wobei sich die Schnittstelle zwischen den beiden Armen befindet (in der Regel 12-20 bp).

2) Mechanismus der Gene-Editing

Doppelkettenbruch (DSB)：

TALE bindet die Zielsequenz → FokI-Dipolymerisation → schneidet die DNA-Doppelkette.

Pfade reparieren：

Nicht-homogene Endverbindung (NHEJ)Zufällige Insertionen / Fehlen (Indels), die zu Genknockout führen.
Homogene Orientierte Reparatur (HDR): Eine Vorlage für eine externe Reparatur ist erforderlich, um eine genaue Einführung oder Punktmutation zu erreichen.

Technischer Durchbruchshu Umsetzungbeliebige GenomstättenPräzises Schneiden und geringere Offtarget-Rate als frühere ZFN-Technologien.

Zwei,TALENS TiermodellKonstruktionsprozess

a) Standardisierte Betriebsschritte

Schlüsseltechnologie Optimierung

Schritte	Kernbetrieb	Innovative Lösungen
Ziel-Design	Vermeiden Sie wiederholte Sequenzen / Methylierungsbereiche, Intervallbereiche sind auf 14-18 bp optimiert	Software-Vorhersage (TALEN Targeter) erhöht die Erfolgsquote
Modulmontage	Golden Gate Klonen：

6 Module in Reihe (+63 Architektur)
Enzymschnittverbindung (BsaI/BsmBI) | 5-fache Effizienz innerhalb von 6 Tagen
|AusdrucksträgerSäugetier-Doppel-Starter-Träger (CMV/T7) zur Unterstützung der Zelltransfektion und mRNA-Synthese Anpassung für Anwendungen mit mehreren Arten (Zebrafisch, Mäuse, menschliche iPS-Zellen)
|Aktive VerifizierungHefe-Single-Hybrid-System oder Zell-Bericht-Gen-Tests Ersatz für zeitaufwendige ES-Zellen, die gezielt werden und den Zyklus auf 1 Woche verkürzen
|Embryo-LieferungMikroinjektion von befruchteten Eiern:
mRNA: In vitro Transkriptionsprodukt von TALENs
RNP-Komplex: TALE-FokI-Proteinkomplex | RNP reduziert Off-Target-Effekte und erhöht die Sicherheit

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